O Neotaq Brilliant Green Plus é um corante fluorescente para ácidos nucleicos utilizado na visualização de DNA e RNA em gel de agarose. Por ser apresentado como alternativa mais segura ao brometo de etídio, seu uso é especialmente relevante em rotinas laboratoriais que exigem sensibilidade analítica associada a boas práticas de biossegurança.
Neste artigo, reunimos *protocolos de uso, *condições técnicas de eletroforese e aplicações descritas em publicações científicas, com foco em laboratórios de pesquisa, diagnóstico e biologia molecular [1–11].
Como usar o Neotaq Brilliant Green Plus
Existem dois modos principais de utilização do corante em eletroforese de ácidos nucleicos: *pré-casting, com incorporação do corante ao gel, e *pós-coloração, com imersão do gel após a corrida eletroforética.
1. Protocolo de pré-casting (adição no gel)
No protocolo de pré-casting, o corante é adicionado diretamente à solução de agarose ainda líquida. De acordo com a especificação técnica do produto, a recomendação é utilizar *4 a 6 µL de Brilliant Green Plus para cada 100 mL de solução de agarose, adicionando-o após a solubilização completa da agarose e com a solução resfriada para aproximadamente *50–60 °C .
Esse formato tende a ser o mais prático para a rotina laboratorial, pois reduz etapas e favorece a padronização do preparo do gel.
2. Protocolo de pós-coloração
Na pós-coloração, o gel é corado após a corrida, por imersão em solução contendo o Brilliant Green Plus . A recomendação técnica é utilizar *10 a 25 µL do corante para cada 100 mL de tampão, com tempo de exposição variável entre *5 e 60 minutos, conforme a espessura do gel e a intensidade de sinal desejada.
Esse protocolo pode ser útil quando se busca maior sensibilidade de detecção, sobretudo em situações em que a visualização de bandas mais discretas é crítica para a análise.
Condições do gel e da eletroforese
O desempenho do corante depende não apenas do protocolo de coloração, mas também das condições de corrida e da composição do gel.
Concentração de agarose
O Neotaq Brilliant Green Plus pode ser empregado em géis com concentração entre *0,8% e 3,0%, cobrindo desde aplicações com fragmentos maiores até separações de fragmentos menores. Em estudos com fungos fitopatogênicos, por exemplo, géis de *0,8% foram utilizados para visualização de regiões-alvo com boa resolução [5,9].
Espessura do gel
Para favorecer coloração homogênea e melhor definição das bandas, recomenda-se que o gel apresente espessura inferior a 0,5 cm . Essa condição contribui para reduzir variações de fluorescência e facilitar a documentação da corrida.
Tampões e voltagem
O produto é compatível com tampões TAE 1X e *TBE 0,5X ou 1X, em condições usuais de eletroforese . Corridas realizadas com *100 V são frequentes em protocolos laboratoriais de rotina e adequadas para separação eficiente de fragmentos de DNA em gel de agarose .
Aplicações científicas do Neotaq Brilliant Green Plus
A literatura citada mostra uso do corante em diferentes áreas da biologia molecular, com aplicação em virologia, fitopatologia, microbiologia, saúde animal e análises de expressão gênica.
Virologia e biologia molecular viral
O corante foi empregado na visualização do genoma completo do *Circovírus Canino, em torno de **2 kb, em estudo de caracterização genômica publicado na *Ciência Rural [1]. Também foi utilizado na investigação de agentes virais associados a problemas reprodutivos felinos, incluindo a amplificação de fragmento do gene *VP2 do vírus da panleucopenia felina, com *442 pb [7].
Além disso, o produto aparece em estudo de análise transcriptômica relacionado à infecção in vitro por herpesvírus canino, reforçando sua aplicação em protocolos de expressão gênica e investigação molecular viral [11].
Fitopatologia, micologia e bacteriologia
Na área de fitopatologia, o corante foi utilizado na visualização da região ITS de fungos como Olivea neotectonae [5] e na caracterização morfológica e molecular de Curvularia lunata [9]. Também aparece em estudos voltados à detecção de patógenos bacterianos, como Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, com fragmentos de 306 pb [3].
Em sementes de milho, a detecção e transmissão de Fusarium verticillioides também foi documentada com uso do corante em protocolos de análise molecular [10]. Já o trabalho com Frankliniella schultzei mostra sua aplicação em detecção molecular por sequenciamento direto e PCR em tempo real, ampliando o espectro de uso em entomologia e diagnóstico agrícola [6].
Saúde animal e oncologia veterinária
Na pesquisa em saúde animal, o corante foi empregado em análises de expressão de proteínas relacionadas à via mTOR em carcinoma prostático canino, no estudo de Rivera-Calderón e colaboradores [8]. Esse tipo de aplicação evidencia a utilidade do produto em contextos de oncologia veterinária e biologia celular.
Sustentabilidade e reutilização de gel
Um ponto de interesse adicional é sua utilização em contextos de reciclagem de gel de agarose. O estudo de Dávida e Ramos demonstrou a efetividade da reciclagem do gel em ambiente laboratorial [2], e essa linha de aplicação reforça o potencial do corante em práticas mais sustentáveis, sem comprometer a visualização molecular em determinadas rotinas experimentais [2].
Por que esse tema tem relevância para laboratórios?
A escolha de um corante para DNA e RNA não envolve apenas sensibilidade de detecção, mas também critérios de *segurança laboratorial, **facilidade de uso, *compatibilidade com protocolos consolidados e *reprodutibilidade. Nesse contexto, o *Neotaq Brilliant Green Plus se posiciona como alternativa alinhada às demandas atuais de laboratórios acadêmicos, clínicos e industriais.
Além disso, o fato de haver uso documentado em diferentes áreas — da virologia à fitopatologia, passando por oncologia veterinária e sustentabilidade laboratorial — amplia sua relevância técnica e científica [1–11].
Conclusão
O Neotaq Brilliant Green Plus é um corante aplicável a diferentes protocolos de eletroforese em gel de agarose, com uso descrito tanto em pré-casting quanto em pós-coloração, além de compatibilidade com diferentes concentrações de gel e tampões usuais de corrida .
Sua presença em estudos científicos envolvendo vírus, fungos, bactérias, expressão gênica e reaproveitamento de gel reforça o valor do produto para laboratórios que precisam conciliar desempenho analítico, segurança e versatilidade experimental [1–11].
Referências bibliográficas
- CRUZ, T. F. et al. Genomic characterization of Canine circovirus detected in a dog with intermittent hemorrhagic gastroenteritis in Brazil. Ciência Rural, v. 50, n. 5, 2020.
- DÁVIDA, D.; RAMOS, P. R. R. Efetividade na reciclagem do gel de agarose em laboratório comercial. Veterinária e Zootecnia, v. 23, n. 1, p. 105-111, 2016.
- GONÇALVES, R. M. et al. Alternative hosts of Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, causal agent of bean bacterial wilt. European Journal of Plant Pathology, v. 148, p. 357–365, 2017.
- GUIMARÃES, L. R. P. et al. Fungicide application can improve production of tomato coinfected with Begomovirus and Crinivirus. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 52, n. 6, p. 435-442, 2017.
- LEÃO, E. U. et al. Extração de DNA e identificação molecular de Olivea neotectonae isoladas de folhas de teca. Journal of Biotechnology and Biodiversity, v. 9, n. 2, p. 222-228, 2021.
- LEÃO, E. U. et al. Efficient detection of Frankliniella schultzei by cytochrome oxidase I gene (mtCOI) direct sequencing and real-time PCR. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 60, 2017.
- OLIVEIRA, I. V. P. M. et al. Research on viral agents associated with feline reproductive problems reveals a high association with feline panleukopenia virus. Veterinary and Animal Science, v. 6, p. 75–80, 2018.
- RIVERA-CALDERÓN, L. G. et al. p-mTOR, p-4EBP-1 and eIF4E expression in canine prostatic carcinoma. Research in Veterinary Science, v. 122, p. 1-15, 2019.
- SANTOS, P. R. R. et al. Morphological and molecular characterization of Curvularia lunata pathogenic to Andropogon grass. Bragantia, v. 77, n. 2, p. 326-332, 2018.
- SOUSA, R. R. et al. Detection and transmission of Fusarium verticillioides in corn seeds according to the plant stage. Acta Scientiarum. Agronomy, v. 44, e53213, 2022.
- VALADARES, T. F. et al. Transcriptomic analysis of differential gene expression reveals an increase in COX2 levels during in vitro canine herpesvirus infection. Ciência Rural, v. 48, n. 10, 2018.
